オオワニガメは一般的に毎年春に発情が始まり、気温が18℃に達すると冬眠から覚め、気温が20℃以上になると発情が始まります。オオワニガメが発情すると、飼育者は体の合うオスとメスを選ぶ必要があるが、ワニガメは交尾の際にオスがメスの背中によじ登ったり、メスをちぎったりすることもあるため、メスの体が小さいとオスの攻撃に抵抗できない。飼育者はワニガメを選んだ後、飼育筒内に入れ、水温を25℃に保った。ワニガメは交尾の際、雄ガメが雌の背中によじ登ったり、雌の繁殖穴に生殖器を入れたりして交尾を終える。オオワニガメが交尾する際、飼育者は周囲の環境を静かにし、繁殖の邪魔になる大きな音が出ないようにする必要がある。メスがオスに噛まれないよう、時々観察してみましょう。雌は5-8月に産卵を開始し、産卵後約2カ月で子ガメが孵化する。
オオワニガメは一般的に4~5年で成熟するが、飼育者が幼少時から冬眠させず、恒温の環境を使って飼育すれば2~3年で成熟する。成体になってからのオオワニガメは毎年2−4月に交尾が始まり、産卵は毎年5−8月に行われる。